BAF3小鼠原B細胞
細胞生長:懸浮 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞數(shù)量:1×106個 細胞傳代:1:3傳代,2-3天傳一代 細胞純度:92.2% 細胞活力:88.4%(Viability by Trypan Blue Exclusion) 細胞檢測:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌 細胞凍存:液氮凍存(*培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS) 細胞運輸:干冰運輸(1 Vial)或活細胞運輸(T-25 flasks) 細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療 培養(yǎng)條件 IMDM,90%;**胎牛血清,10% 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5% 溫度:37攝氏度 BAF3小鼠原B細胞 傳代方法 顯微鏡下觀察細胞,當覆蓋80%底面積時,進行細胞傳代。注意不要等到細胞覆蓋100%的時候才傳代,那樣細胞容易老化。在生物安全柜或者超凈臺中,將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基倒到廢液缸中用PBS或者生理鹽水洗一遍加入1.5ml 0.25%含有EDTA的胰酶,在37℃培養(yǎng)箱中消化3-5分鐘后取出細胞,加入5ml培養(yǎng)基,吹打均勻后,轉(zhuǎn)移到15ml離心管中,1000rpm 離心5分鐘離心后,去掉上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞,按照1:3的比例進行細胞傳代培養(yǎng)。 傳代密度均勻,有以下幾點比較重要: 1.盡量消化細胞分散成單細胞懸液。對于易于消化的細胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶潤洗一遍(25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板),棄掉胰酶,37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右,鏡下觀察是否細胞消化較為分散。如果不夠,延長消化時間。我見過有些剛進實驗室的師弟師妹,一上來就加1-2ml胰酶,結果細胞團大片脫落,雖然有后續(xù)吹打步驟,但我覺得效果不佳。至于難消化的細胞,怎么掌握分寸,還待自己摸索或其他戰(zhàn)友分享。 2.在以上基礎上,我覺得細胞吹勻,這步比上述提到的十字移動等更為重要。如傳代1:4 ,可以收集所有細胞至離心管,加入培養(yǎng)液重懸混勻,吸管緩慢吹打20-30次,可配合水平搖晃離心管。 3.此外我覺得培養(yǎng)液的量可能也會有講究,如6孔板中你*終加入2ml細胞懸液,尤其像這樣的小面積培養(yǎng)皿,液體表面有張力,細胞易于聚集在中間,所以我一般6孔板再加1ml以消除影響,吸管緩慢吹打15-20次左右繼續(xù)混勻。 NCI-H1650細胞 人非小細胞肺癌細胞 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁 |